western印迹法

简介

检测原理

简介

蛋白质经单向电泳后分离后被转移到硝酸纤维滤膜上，然后用放射性或酶标记的特异抗体来检测相应抗原的存在。

蛋白质印迹技术是1975年Southern建立了Southern印迹法后，人们用类似的方法对蛋白质进行印迹分析，称为Western印迹法。

检测原理

Western印迹法是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，对不同分子量的蛋白质进行分离，然后通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印到固相支持物上。固相支持物包括NC（硝酸纤维素）膜、尼龙膜及PVDF（聚偏氟乙烯）膜等。通常使用的PVDF膜的规格是0.45 μm，如果靶蛋白的分子量小于10KD，则选用0.22μm的PVDF膜。转膜的的方式有湿转和半干转。用抗靶蛋白的非标记抗体（一抗）与膜进行杂交，使抗体与靶蛋白特异性结合后，再与经辣根过氧化物标记的二抗结合，最后用ECL试剂反应，经X线片曝光、显影等一系列反应，达到检测靶蛋白的目的。