样品包埋

简介

生物样品包埋块的制备方法

电镜样品包埋块制备过程

简介

在电镜样品的制备过程中有时需要平板包埋,例如进行免疫电镜包埋前组织化学技术时一般需要先将组织做振动切片或冰冻切片,进行免疫组化反应后,再按常规脱水、浸透、最后置硅化过的载玻片上进行平板包埋。采用上述平板包埋法,首先要将载玻片经过清洁液浸泡叫流水冲洗→100%酒精浸泡→稍洗→10%NaOH浸泡2-3分钟→充分流水冲洗,再用硅液(例如12%的Sigmacote,Sigma)浸泡12分钟,烤干制备成硅化玻片。其困难是硅液来源不便,

生物样品包埋块的制备方法

利用2％戊二醛固定液对生物组织样品或细胞样品等进行低温固定，经0.2mol/L磷酸缓冲液冲洗后，按照50％→70％→95％→无水乙醇→绝对乙醇的乙醇梯度进行脱水，经环氧树脂618渗透后进行包埋，然后加热聚合，加热温度和时间为：35℃12小时→45℃12小时→60℃24小时。从而获得了适合于原子力显微镜观察的生物样品包埋块。本发明方法步骤较为简单，所用试剂多为国产，易得且价格低廉，适合各种动物组织和细胞样品的包埋块制作。

电镜样品包埋块制备过程

1取材 动作要快，部位要准确。组织块要小，在0.5——1mm3，低温下（4℃）操作。

2固定 取完材立刻投入3%戊二醛固定液中固定2小时或稍长一点时间

3清洗 用0.1M磷缓洗3次，每次10分钟

4后固定 用1%OsO4（锇酸）后固定2小时

5清洗 用0.1M磷缓洗3次，每次10分钟

6脱水 50%乙醇15分钟——→ 70%乙醇15分钟或保留样品时间稍长一些 ——→ 80%乙醇15分钟 ——→ 90%乙醇15分钟 ——→ 100%乙醇110分钟换无水丙酮两次，每次10分钟

7浸透 丙酮：包埋剂 1：1 浸透1小时30分钟 纯树脂浸透过夜

8包埋

9聚合 37℃（12小时）——→ 45℃（12小时）——→60℃（24小时）