牛传染性鼻气管炎_在线百科全书查询
牛传染性鼻气管炎
牛传染性鼻气管炎(IBR)又称“坏死性鼻炎”、“红鼻病”，是I型牛疱疹病毒(BHV-1)引起的一种牛呼吸道接触性传染病。临床表现形式多样，以呼吸道为主，伴有结膜炎、流产、乳腺炎，有时诱发小牛脑炎等。
简介
急性IBRV呼吸道感染还可以继发细菌性肺炎。此病目前在世界范围内流行，对乳牛的产奶量、公牛的繁殖力及役用牛的使役力均有较大影响。20世纪50年代初，以传染性鼻气管炎症状为特征的疾病最先见于美国科罗拉多州的育肥牛群，随后相继出现于洛杉矶和加利福尼亚等地，并命名为牛传染性鼻气管炎(简称IBR)。Madin等于1956年首次从患牛分离到病毒后，一些研究者相继从病牛的结膜（1961）、外阴（1959）、大脑（1962）和流产胎儿（1964）中分离出病毒。Huck于1964年确认牛鼻气管炎病毒属于疱疹病毒。1980年我国从新西兰进口奶牛中首次报道该病，并分离到一株牛传染性鼻气管炎病毒，随后经血清学调查证实，我国广东、广西、河北、河南、上海、山东、四川、甘肃、新疆、黑龙江和青海等省市的黑白花乳牛、本地黄牛、水牛或牦牛均有IBR病毒存在。在一些交通极不便利的地区，IBR病毒抗体阳性率极高。
一、病原学
牛传染性鼻气管炎（IBR）是由牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）或牛疱疹病毒I型（BHV-Ⅰ）引起，IBRV在分类地位上属疱疹病毒科a疱疹病毒亚科。该病毒呈球形，带囊膜，成熟病毒粒子的直径约150～220 nm，主要由核心、衣壳和囊膜三部分组成。核心由双股DNA与蛋白质缠绕而成，包含基因组的核衣壳为立体对称的正二十面体，外观呈六角形，有162个壳粒，周围为一层含脂质的囊膜。双股DNA分子量为8.4x106，其中G+C含量为72%，浮密度为1.731 g/cm 。 IBRV基因组是138 Kb的线性双股DNA分子，分成特异长区（UL，106 Kb）和短区（US，10 Kb），后者被两个反向重复序列（IRS，TRS各为11 Kb）包围，因而短区能够反转方向，使病毒DNA具有两种异构体。据测IBRV基因组可编码大约70个蛋白质，其结构和功能目前大部分已知，存在于病毒囊膜的gB、gC、gD和gE四个主要精蛋白基因已经测序并在哺乳动物中表达。gB在哺乳动物细胞中的表达显示出引起细胞融合和多核体的形成，对病毒复制是必需的；gC对病毒吸附组织培养细胞是重要的，但它在牛细胞内的表达并不影响病毒蚀斑的数量和病毒的存在；gD被认为是病毒粒子表面和病毒感染细胞的主要分子，抗体糖蛋白的单克隆抗体在病毒吸附后中和病毒并显示出较高的中和滴度，表明gD可能参与病毒进入细胞，并为病毒复制非必需基因。鼠和牛的免疫试验显示出gD能够引起比gB、gC更强和持久的细胞免疫。
二、诊断
本病的典型病例（上呼吸道炎）具有鼻黏膜充血、脓疱、呼吸困难、鼻腔流脓等特征性症状，结合流行病学，可做出初步诊断，但确诊必须依靠实验室诊断，包括病毒分离鉴定和血清学试验。通常检测血清样品中BHV1抗体的方法有病毒中和试验（VN）和各种酶联免疫吸附试验（ELISA）。另外，还有琼脂扩散试验和间接血凝试验。因为IBRV感染后一般发生病毒潜伏，所以，鉴定血清学中阳性动物是检查动物感染状态非常有用而且理想的指标。抗体阳性动物可认为是病毒携带者和潜在的间歇性排毒者，从初乳获得母源抗体的犊牛和经灭活疫苗免疫的非感染牛除外。
（一）病毒中和试验
中和试验是以测定病毒的感染力为基础的，以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依据，判定免疫血清中和病毒的能力。它被认为是血清抗体检测最标准的方法。IBRV只有1个血清型，只要有1个已知标准毒株的免疫血清，通过在敏感细胞培养后所进行的中和试验就可以作出鉴定，但该方法存在费时费力、试验周期长、易受不确定因素影响，如病毒毒价的准确性、细胞量的多少及生长情况、病毒/血清孵育时间长短不同等因素将直接影响中和试验的结果，目前在检疫中逐步被酶联免疫吸附试验(ELISA)所替代。
（二）ELISA
ELISA法是将酶与抗原结合成酶标记物，这些酶标记物仍保持原有的免疫学活性和酶的活性，它可与吸附在固相载体上的抗体发生特异性结合，滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型，出现颜色反应。因此，可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应，颜色反应的深浅与标本中相应抗体量呈正比，此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定。ELISA法因其具有快速、敏感、简便、易于标准化等优点，在大批量动物进口时作为首选方法被推广使用，但经长期应用发现，目前市场上已商品化的ELISA试剂盒或多或少存在有质量问题，出现假阳性或假阴性的几率较大，很难确保检疫质量，而且进口的试剂盒价格普遍偏高，无形中又增加了检疫的成本。
（三）琼脂扩散试验
可用已知的IBR抗原检查被检血清中的沉淀抗体，也可用IBR阳性血清来检测病料标本或细胞培养物中的相应抗原。
（四）间接血凝试验
将已知抗原结合在鞣酸处理的绵羊红细胞上，采用常规的试管凝集法或微量凝集法来检查被检测血清中的相应抗体，这是一种简便、快速、实用的诊断方法。由于IBRV有潜伏感染性，自然感染病牛中和抗体滴度在感染2周时才达到高峰，并且在持续2周或4周后即逐渐下降，且可能降到零，进入潜伏感染期。此后，一旦应激因素刺激，抗体滴度又上升，并排毒，如此反复，IBR感染牛的抗体滴度也随之呈现波浪式的起伏。因此，即便通过中和试验或ELISA法判定牛群IBR抗体呈阴性反应，仍难保证牛群确无IBRV感染。由此可认为，要确定1个牛群是否有IBRV感染的最根本的方法应当是检测IBR抗原。
（五）病毒分离鉴定
1.样品的收集和处理：从早期感染牛采集鼻腔拭子。对于外阴道炎和**炎病例，采取生殖道拭子，用拭子在生殖道阴道黏膜表面上用力刮取，**可用生理盐水冲洗包皮，收集其洗液。所有样品均应悬浮于运输培养基（含抗生素和2%犊牛血清的组织培养液），储存于4℃，并迅速送达实验室。样品送到实验室后，将拭子在运输培养基中充分搅动以便将病毒洗脱，室温放置30 min再取出拭子，将运输液1500 r/min离心10 min，取上清液用作病毒分离的样品。用做病毒分离的精液需经特殊处理，因为精液中含有对细胞有毒或对病毒增殖有抑制作用的酶和其它因子。
2.病毒分离：多种细胞可用于IBRV分离，牛胎儿肺、鼻甲或气管等组织制备的细胞株及已建立的传代细胞系（如MDBK细胞）都比较合适。当使用24孔塑料培养板时，每孔需接种细胞培养物上清液100 μl～200 μl，吸附1h后倾去液体，然后，加入维持液。每天观察细胞病变情况，一般于接种后3 d出现细胞病变现象（CPE）。细胞的典型变化是圆缩，聚集成葡萄样群落，在单层细胞上形成空洞，有时会发现有数个细胞核的巨大细胞。若7 d还不出现CPE，应再盲传1次，将培养物经反复冻溶后离心，取其上清液用于接种新的单层细胞做进一步病毒分离。为鉴定致细胞病变的病毒是否为IBRV，细胞培养的上清液必须与单特异IBRV抗血清或单克隆抗体(MAb)作中和试验。
（六）免疫荧光试验
用来检查眼结膜触片、组织切片和细胞培养物涂片中的IBRV。
（七）PCR法
1993年，Vilcek将聚合酶链式反应(PCR)方法用于IBR的诊断。试验证明，PCR比病毒分离更加敏感，阳性检出率比病毒分离高出5倍。甚至可检出3个分子的病毒。由于其具有很高的灵敏度而能够在检测牛血清中微量的IBRV等方面得到重要应用。因此，将PCR技术应用到进出境牛的传染性鼻气管炎病毒的检疫，将会大大降低检疫成本和检疫周期，并有效的提高检出率，为打破贸易技术壁垒、促进我国外贸事业的进一步发展，保护我国畜牧业生产的安全发挥出极大的作用。
