精子免疫荧光技术

精子免疫荧光技术

诊法。免疫标记技术之一 。可用以研究抗精子抗体。包括三个基本步骤：空气干燥后用甲醇固定的精子涂片作为抗原 底物；涂片暴露于待测血清(宫颈黏液、精浆)中；然后接触荧光标记的免疫球蛋白，即可在荧光显微镜下观察到抗原抗体反应。操作方法：取供精者精液0?2ml，用10ml生理盐水洗涤2次，680g离心5分钟。将洗过的精子悬浮在盐水中，调至10×106精子/ml。取1滴精子悬浮液做涂片，电扇下吹30分钟，使之干燥后放入100%甲醇中30分钟以固定干燥的精子。再将其置入磷酸缓冲盐水中(PBS，pH7?2)。晾干涂片后， 加1滴待测血清，将其放在潮湿盒子内，室温下置1小时，然后用PBS将血清冲去，再洗2次，隔10分钟换1次PBS。亦可将涂片与异硫氰酸荧光素(FITC)结合之抗血清孵育30分钟，经多次冲洗，最后浸泡在含10%甘油的磷酸缓冲液中。荧光显微镜下观察，在未稀释的血清中常见不明原因的微弱染色，故滴度大于1∶16时方为阳性结果。