李斯特氏菌属

目前已知的李斯特氏菌属有7个菌种，即单核细胞增生李斯特氏菌，绵羊李斯特氏菌，英诺克李斯特氏菌，威尔斯李斯特氏菌 ，西尔李斯特氏菌 ，格氏李斯特氏菌 ，莫氏李斯特氏菌。一、李斯特菌食物中毒

该菌属主要引起食物中毒的主要是单核细胞增生李斯特氏菌；1926年由Murray首先发现，可引起兔子单核性白细胞急剧增加，后来发现可以起孕妇流产和脑炎。

(一)生物学特性

该菌为革兰氏阳性短杆菌，大小约为0.5μmх1.0-2.0μm,直或稍弯，两端钝圆，常呈V字型排列，偶有球状、双球状，兼性厌氧、无芽胞，一般不形成荚膜，但在营养丰富的环境中可形成荚膜，在陈旧培养中的菌体可呈丝状及革兰氏阴性，该菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脱落。

（二）生长条件及培养特性

该菌的生长范围为2--42℃（也有报道在0℃能缓慢生长），最适培养温度为35--37℃，在pH中性至弱碱性（pH9.6）、氧分压略低、二氧化碳张力略高的条件下该菌生长良好。

在含2.5g/L琼脂，80g/L明胶和10g/L葡萄糖的半固体培养基中，37℃培养24h,生长物沿穿刺线以不规则云雾状延伸到培养基内，进而扩散到整个培养基，生长达最高量时在培养基表面下3~5mm处形成一丝伞状的界面。羊肝浸出液琼脂上的菌落：圆形，光滑，奶油状，稍扁平，用透过光观察是透明的。

在血琼脂上生长良好，四周有狭窄的溶血带，因血的种类而有变化。

（三）生化反应

该菌触酶阳性，氧化酶阴性，能发酵多种糖类，产酸不产气，如发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖，不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖，不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解，吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性，VP、甲基红试验和精氨酸水解阳性。

（四）血清型

根据菌体（O）抗原和鞭毛(H)抗原，将单增李氏菌分成13个血清型，分别是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e 和“7”13 个血清型。致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,后两型尤多。

（五）抵抗力

该菌对理化因素抵抗力较强，在土壤、粪便、青储饲料和干草内能长期存活，对碱和盐抵抗力强，60-70℃经5-20min可杀死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林20min 可杀死此菌。该菌对青霉素、氨苄青霉素、四环素、磺胺均敏感。

（六）来源与分布及感染途径

单增李斯特氏菌广泛存在于自然界中，不易被冻融，能耐受较高的渗透压，在土壤、地表水、污水、废水、植物、青储饲料、烂菜中均有该菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播。据报道，健康人粪便中单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70%的人可短期带菌，4-8%的水产品、5-10%的奶及其产品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅饼、冻猪舌等而感染，约占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。

该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进入体内而造成感染，孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性接触也是本病传播的可能途径，且有上升趋势。

(七) 临床症状

健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产、脑膜炎、败血症直至死亡。

（八）控制

单增李斯特氏菌在一般热加工处理中能存活，热处理已杀灭了竞争性细菌群，使单增李斯特氏菌在没有竞争的环境条件下易于存活，所以在食品加工中，中心温度必须达到70℃持续2分钟以上。

由于单增李斯特氏菌在4℃下仍然能生长繁殖，所以未加热的冰箱食品增加了食物中毒的危险。冰箱食品需加热后再食用。

（九）检测

（1）传统分离鉴定方法

增菌培养→生化反应 →动物实验→协同溶血试验→血清型分析样品：

冷冻样品，2－5℃解冻，不超过18h

若不能及时检验，应置于－15 ℃保存。

非冷冻易腐样品应尽可能及时检验。

若不能及时检验，应置于4 ℃冰箱保存，在24h之内检验。

增菌方法:

冷增菌法 ：将样品置于胰蛋胨水中4~5℃增菌一个月，再划线分离

缺点：时间太长，不适于食品卫生的常规检验。

快速增菌法 常用选择性增菌法，分步增菌，增加病原检出率

总之，传统的单核细胞增生李斯特氏菌的检测方法全过程需4~7D，而且没有一种培养基可以全面的保持所有食品基质或各种李斯特氏菌血清型

（2）免疫学检测方法

免疫学检测方法就是利用抗原抗体反应的显著特异性，而建立的一种快速检测食品中病原菌的方法。

目前主要利用ELISA技术

特点：操作简便，快速，可在同一时间内检测大量样品，可将纯肉汤培养物中的分离物进行术水平的鉴定，但难以进行菌种间的特异分析。

ELISA法的检测极限为105~106cfu/mL

（3）核酸检测方法

该方法以李斯特氏菌属或种特异核酸序列的互补序列为探针进行李斯特氏菌属或种水平的鉴定

目前多利用PCR技术

特点：敏感性好，但必须经过选择性增菌以稀释可能干扰检测反应的某些成分。

探针杂交技术检测极限为105~106cfu/mL